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文章要點(diǎn):上海樂(lè)楓市場(chǎng)部對(duì)目前疫情防控工作中的熒光定量PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)做了深入淺出地闡述,并為該實(shí)驗(yàn)中使用的純水設(shè)備做了解析和介紹。
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目前疫情的防控工作取得了階段性的成效,基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)在新冠病毒快速鑒定及確診中發(fā)揮了重要作用。
什么是實(shí)時(shí)熒光定量PCR?
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技術(shù),簡(jiǎn)稱qPCR,是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)(熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
與普通PCR相比,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一次由定性技術(shù)向定量技術(shù)的飛躍。運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù),可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行相對(duì)定量、定量和定性分析。
實(shí)驗(yàn)流程:
在實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中,可以分為樣本采集,RNA提取,RNA質(zhì)量鑒定,反轉(zhuǎn)錄及數(shù)據(jù)分析幾個(gè)步驟,在進(jìn)行引物、模板的稀釋,試劑的配制和補(bǔ)足反應(yīng)體系時(shí)都會(huì)用到水,水質(zhì)量的好壞直接影響終數(shù)據(jù)分析的結(jié)果。
水中的顆粒物,離子含量,有機(jī)物及細(xì)菌微生物等雜質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)都會(huì)帶來(lái)影響,zui值得關(guān)注的因素有以下兩個(gè)方面:
1. DNA酶和RNA酶
DNA酶和RNA酶能夠特異性地降解DNA和RNA。在進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR時(shí),去除這兩種酶從而保證提取的RNA和DNA樣本的完整性十分關(guān)鍵。尤其在提取RNA的時(shí)候,RNA極易被降解。這是因?yàn)镽Nase非常穩(wěn)定,且無(wú)處不在,用常規(guī)的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑制劑不能使所有的RNase*失活。如果樣本中的核酸被降解,會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,甚至造成假陰性檢測(cè)結(jié)果。
因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)用超純水必須有效降低DNA酶和RNA酶的含量,減少對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。
2. 鎂離子
實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)需要根據(jù)不同的引物對(duì)和模板確定zuijia的鎂離子濃度。
Mg2+濃度過(guò)低,會(huì)影響DNA聚合酶的活性,導(dǎo)致產(chǎn)量降低,影響實(shí)時(shí)定量的敏感性;
Mg2+濃度過(guò)高,會(huì)增加引物二聚體的形成,這會(huì)影響特異性。
因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)用超純水必須控制Mg2+濃度,避免背景因素帶來(lái)的不確定性。
綜上,實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)推薦使用超純水,水質(zhì)要求如下圖所示:
純水儀器選型推薦:
根據(jù)上述的分析和用水指標(biāo),可以采用樂(lè)楓的Genie G一體超純水機(jī)和Genie PURIST超純水機(jī),這兩種純水設(shè)備都可以滿足實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)的用水要求。
南科大安裝的 Genie G
GenieG和Genie PURIST純水設(shè)備是上海樂(lè)楓RephiLe為e 時(shí)代的實(shí)驗(yàn)室純水需求開(kāi)發(fā)的智能型實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng)。
采用了無(wú)線技術(shù),主機(jī)、主控屏和手柄之間采用無(wú)線連接,按需隨意放置。
耗材/ 零部件實(shí)現(xiàn)了可全程追溯,quan方位監(jiān)控的要求,防水的控制屏可帶手套操作。
Genie純水儀設(shè)計(jì)緊湊,體積小,可掛墻,可置于臺(tái)盆下,方便用戶合理利用空間。
其中,GenieG采用了EDI模塊,可從自來(lái)水制備超純水和EDI純水,為實(shí)驗(yàn)不同需要帶來(lái)方便。Genie PURIST則是從純水制備超純水的一款儀器,安裝使用非常方便。
該兩款設(shè)備還有兩個(gè)很重要的優(yōu)勢(shì)可以適用于qPCR實(shí)驗(yàn):
? Genie系列超純水機(jī),可以配置樂(lè)楓RephiLe配方填料的低鎂型純化柱,不但可以廣譜去除水中的金屬離子,還可以特異性去除水中的鎂離子,保證超純水中Mg2+對(duì)qPCR實(shí)驗(yàn)零干擾。這種低鎂型純化柱是樂(lè)楓dujia提供,專為PCR和測(cè)序?qū)嶒?yàn)研究開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品。
? 裝有帶電荷尼龍膜的RephiBio終端濾器。 RephiBio可以除DNA酶和RNA酶,避免核酸酶對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。
配備了低鎂型純化柱和RephiBio,GenieG和GeniePURIST可以為你的熒光定量PCR反應(yīng)保駕護(hù)航。
中科大安裝的 Genie PURIST
Genie系列純水機(jī)水質(zhì)穩(wěn)定,品質(zhì)高,而且有數(shù)據(jù)保證:水質(zhì)已經(jīng)通過(guò)第三方省級(jí)以上檢測(cè)機(jī)構(gòu)的檢測(cè);RephiBio終端過(guò)濾器,也具有國(guó)外實(shí)驗(yàn)室熱源、DNase和RNase的檢測(cè)報(bào)告。使用Genie系列超純水機(jī),可以確保超純水對(duì)qPCR反應(yīng)的不確定性降至低,讓用戶“用水無(wú)憂”,享受的體驗(yàn)。
關(guān)鍵詞:新冠肺炎,純水, qPCR, 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng), Taq酶, 上海樂(lè)楓, RephiLe, Genie 純水機(jī), Super-Genie 純水機(jī)
上海樂(lè)楓生物科技有限公司
上海樂(lè)楓(Rephile Bioscience,Ltd.) 是一家專業(yè)從事水純化和實(shí)驗(yàn)室分離純化產(chǎn)品研發(fā)、設(shè)計(jì)和制造的企業(yè),為高科技生物技術(shù)和生命科學(xué)領(lǐng)域的用戶服務(wù)。樂(lè)楓公司著眼于發(fā)展,在中國(guó)、美國(guó)、法國(guó)、印度、南非等近20個(gè)國(guó)家建立了銷售機(jī)構(gòu),同時(shí)也為大型公司提供OEM和ODM,產(chǎn)品銷往包括歐美的近100個(gè)國(guó)家。成立十余年,樂(lè)楓持續(xù)投入研發(fā),創(chuàng)立出了自己的產(chǎn)品品牌RephiLe(瑞楓),推出了多個(gè)新概念產(chǎn)品- 無(wú)線連接的Genie系列純水系統(tǒng)和智能型大流量純水工作站Super-Genie等。目前樂(lè)楓純化柱填料配方齊全,也提供多款密理博純水系統(tǒng)的兼容耗材。
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